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雙向擴散試驗
雙向擴散試驗是讓抗原和抗體雙方都在瓊脂中各自向對方擴散,在比例恰當之處形成抗原抗體沉淀線(xiàn),觀(guān)察這種沉淀線(xiàn)的位置、形狀以及對比關(guān)系,可對抗原或抗體進(jìn)行定性分析。根據試驗形式也可分為試管法和平板法兩種。
(一)試管法
(二)平板法
是鑒定抗原抗體的最基本、最常見(jiàn)的方法之一。根據沉淀線(xiàn)的有無(wú)、形態(tài)和位置可作如下分析:
1.抗原或抗體的存在與否以及相對含量的估計 沉淀線(xiàn)的形成是根據抗原抗體兩者比例所致,沉淀線(xiàn)如果靠近抗原孔,則表示抗體含量較大;沉淀線(xiàn)如果靠近抗體孔,則表示抗原含量較大;不出現沉淀線(xiàn)則表明無(wú)對應的抗體或抗原或者抗原過(guò)量。
2.抗原或抗體相對分子量的分析 抗原或抗體在瓊脂內自由擴散,其速度受分子量的影響。分子量小者擴散快,反之則較慢。由于慢者擴散圈小,局部濃度則較大,形成的沉淀線(xiàn)彎向分子量大的一方;如果兩者分子量大致相等,則形成直線(xiàn)。
3.抗原性質(zhì)的分析 兩種受檢抗原的性質(zhì)可完全相同、部分相同或完全不同。三種情況在雙向擴散試驗中表現如下:兩條沉淀線(xiàn)互相吻合相連,表明抗體與兩個(gè)抗原中的相同表位結合而沉淀,兩個(gè)抗原相同;沉淀線(xiàn)呈部分相切,說(shuō)明兩個(gè)抗原之間有部分相同;兩條沉淀線(xiàn)交叉而過(guò),說(shuō)明兩個(gè)抗原完全不同。
4.抗體效價(jià)的滴定 雙向擴散試驗是抗血清抗體效價(jià)滴定的常規方法。固定抗原的濃度,稀釋抗體;或者抗原和抗體雙方皆作不同的稀釋?zhuān)?jīng)過(guò)自由擴散,形成沉淀線(xiàn),以出現沉淀線(xiàn)最高的抗體稀釋度為該抗體的效價(jià)。
5.抗原或抗體純度鑒定 用混合抗原或抗體鑒定抗體或抗原,出現一條沉淀線(xiàn)說(shuō)明待測抗原或抗體純,出現多條沉淀線(xiàn)說(shuō)明不純。
雙向擴散試驗簡(jiǎn)單易行,用途廣泛,但該技術(shù)靈敏度低,出現結果慢,不能精確定量,這些弱點(diǎn)在相當程度上限制了它的應用。
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